幾種顯微鏡種類的介紹

暗視野顯微鏡在普通光學(xué)顯微鏡臺(tái)下配一個(gè)暗視野聚光器（圖4）,來(lái)自下面光源的光線被拋物面聚光器反射，形成了橫過顯微鏡視野而不進(jìn)入物鏡的強(qiáng)烈光束。因此視野是暗的，視野中直徑大于 0.3m的微粒將光線散射，其大小和形態(tài)可清楚看到。甚至可看到普通明視野顯微鏡中看不見的幾個(gè)毫微米的微粒。因此在某些細(xì)菌、細(xì)胞等活體檢查中常常使用。

實(shí)體顯微鏡由雙筒目鏡和物鏡構(gòu)成。放大率 7～80倍。利用側(cè)上方或下方顯微鏡燈照明。在目鏡內(nèi)形成一個(gè)直立的放大實(shí)像，可以觀察未經(jīng)加工的物體的立體形狀、顏色及表面微細(xì)結(jié)構(gòu),并能進(jìn)行顯微解剖操作,也可以觀察生物機(jī)體的組織切片。

熒光顯微鏡在短波長(zhǎng)光波(紫外光或紫藍(lán)色光,波長(zhǎng)250～400nm）照射下，某些物質(zhì)吸收光能，受到激發(fā)并釋放出一種能量降級(jí)的較長(zhǎng)的光波（藍(lán)、綠、黃或紅光，波長(zhǎng)400～800nm），這種光稱熒光。某種物質(zhì)在短光波照射下即可發(fā)生熒光，如組織內(nèi)大部分脂質(zhì)和蛋白質(zhì)經(jīng)照射均可發(fā)出淡藍(lán)色熒光，稱為自發(fā)性熒光。但大部分物質(zhì)需要用熒光染料（如吖啶橙、異硫氰酸熒光素等）染色后，在短光波照射下才能發(fā)出熒光。熒光顯微鏡的光源為高壓汞燈，發(fā)出的紫外光源經(jīng)過激發(fā)濾光片(此濾光片可通過對(duì)標(biāo)本中熒光物質(zhì)合宜的激發(fā)光)過濾后射向普勒姆氏分色鏡分色鏡將激發(fā)光向下反射,通過物鏡投射向經(jīng)熒光染料染色的標(biāo)本。染料被激發(fā)并釋放出熒光,通過物鏡,穿過分色鏡和目鏡即可進(jìn)行觀察。目鏡下方安置有屏障濾片(只允許特定波長(zhǎng)的熒光通過)以保護(hù)眼眼及降低視野暗度。熒光顯微鏡的特點(diǎn)是靈敏度高，在暗視野中低濃度熒光染色即可顯示出標(biāo)本內(nèi)樣品的存在，其對(duì)比約為可見光顯微鏡的 100倍。30年代熒光染色即已用于細(xì)菌、霉菌等微生物及細(xì)胞、纖維等的形態(tài)觀察和研究。如用抗酸菌熒光染色法可幫助在痰中找到結(jié)核桿菌。40年代創(chuàng)造了熒光染料標(biāo)記蛋白質(zhì)的技術(shù)，這種技術(shù)現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于免疫熒光抗體染色的常規(guī)技術(shù)中，可檢查和定位病毒、細(xì)菌、霉菌、原蟲、寄生蟲及動(dòng)物和人的組織抗原與抗體，可用以探討病因及發(fā)病機(jī)理，如腎小球疾病的分類及診斷，乳頭瘤病毒與子宮頸癌的關(guān)系等。在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究及疾病診斷方面的用途日益廣泛。

偏光顯微鏡從光源發(fā)出的光線通過空氣和普通玻璃時(shí)，在與光線垂直的平面內(nèi)的各個(gè)方向以同一振幅進(jìn)行振動(dòng)并迅速向前方傳遞，這是光的波動(dòng)性原理。空氣與普通玻璃為各向同性體，又稱單折射體。如果該光源的光通過一種各向異性體（又稱雙折射體）時(shí)，會(huì)將一束光線分為各只有一個(gè)振動(dòng)平面的，而且振動(dòng)方向互相垂直的兩束光線。這兩束光線的振動(dòng)方向、速度、折光率和波長(zhǎng)都不相同。這樣只有一個(gè)振動(dòng)平面的光線稱偏振光。偏光顯微鏡即利用這一現(xiàn)象而設(shè)計(jì)。偏光顯微鏡內(nèi)，在物鏡與目鏡間插入一個(gè)檢偏鏡片，光源與聚光器間鑲有起偏鏡片，圓形載物臺(tái)可以作360°旋轉(zhuǎn)。起偏與檢偏鏡片處于正交檢偏位時(shí)，視野完全變黑。將被檢物體放在顯微鏡臺(tái)上。若被檢物為單折射體，則旋轉(zhuǎn)鏡臺(tái)，視野始終黑暗。若旋轉(zhuǎn)鏡臺(tái)一周，視野內(nèi)被檢物四明四暗，則說明被檢物是雙折射體。許多結(jié)晶物質(zhì)（如痛風(fēng)結(jié)節(jié)中的尿酸鹽結(jié)晶、尿結(jié)石、膽結(jié)石等），人體組織內(nèi)的彈力纖維、膠原纖維、染色體和淀粉樣原纖維等都是雙折射體，可借偏振光顯微鏡術(shù)檢驗(yàn)，進(jìn)行定性和定量分析。