顯微攝影是一項(xiàng)重要的顯微技術(shù)，同再現(xiàn)
顯微鏡中物體影象的各種方法比較，顯微攝影是最好的方法。它對以顯微鏡作為研究工具的研究人員是必備的手段，尤其在研究染色體及其分子特征時(shí)，就更加顯得必要了�，F(xiàn)在數(shù)碼相機(jī)的問世，又使顯微攝影變得更為簡便，且效果好。在有關(guān)學(xué)術(shù)研究和理論探討時(shí)，一幀好的顯微照片，可以省去許多的文字描述，并且使人心悅誠服。何況在生物學(xué)領(lǐng)域中，確有不少問題的研究，必須借助顯微攝影。
p'fU}B1 M1^,g~e 下面，僅以植物染色體作為拍攝材料，概述顯微攝影的基本方法，數(shù)碼顯微攝影的操作流程和傳統(tǒng)的顯微攝影基本一樣，只是省去了底片和暗房技術(shù)，由計(jì)算機(jī)完成。
_pnJ/YE q["CT& 0 一、顯微攝影對制片標(biāo)本的要求
}Z u>?U =X'i^Q 染色體只見于有絲分裂和減數(shù)分裂的細(xì)胞核中，根尖、莖端、幼嫩花藥和胚珠是鏡檢染色體的材料，尤以根尖和花藥更為常用。觀察染色體的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和數(shù)量，常用酶解或壓片法制片。此法能保持染色體的完整，并能接近于活體狀態(tài)。一張好的顯微照片，來源于完好的染色體制片標(biāo)本。適于拍照的制片標(biāo)本，應(yīng)具下列條件：
zB kS1qMn ?kqo~twJ 1、選用標(biāo)準(zhǔn)的載玻片和蓋玻片
光源入射光束，經(jīng)載玻片透射標(biāo)本，再經(jīng)蓋玻片進(jìn)入
物鏡，處于光路之中的玻璃，應(yīng)是表面無傷，內(nèi)無氣泡；外無霉斑。這樣可以杜絕光線亂反射，防止阻光、降低亮度以及有損清晰度。載玻片厚度不宜超出聚光鏡的
焦距，一般在2毫米以內(nèi)，可將光源的光束集中于載玻片的標(biāo)本上。蓋玻片的標(biāo)準(zhǔn)厚度為0.17毫米，若使用厚度大于工作距離的蓋玻片，物鏡前
透鏡會觸及蓋玻片，同時(shí)不能準(zhǔn)焦；蓋片厚，球差就大，會降低影象質(zhì)量。有效蓋片厚度，包括封固劑的厚度，即樹膠或尤派膠用量，因此，封固劑要調(diào)稀，少許滴加一薄層。
: " 9F.U : n 4? 2、染色體處于相宜的時(shí)期，平展逸散，完整無損 染色體的計(jì)數(shù)和組型分析，以有絲分裂的中期(或晚前期)，減數(shù)分裂的終變期和粗線期為宜。這時(shí)染色體收縮變短，呈典型狀態(tài)，易識別。通過前處理的精細(xì)加工，染色體相互逸散，互不接觸，并盡可能使之平展于同一水平面上，又不失細(xì)胞的完整輪廊(圖3-1)。
6hv4D`d ;o uW3`gwwlU 3、染色鮮明適度 染色體過染，染料堆積，使染色體模糊成一塊，難以辨別細(xì)節(jié)，缺乏質(zhì)感；染色體著色過淺，使影象不鮮明，辨認(rèn)不清，反差不大。染色體染色以藍(lán)紫為佳，色彩鮮明，膠片易感受，拍攝效果好。一般多用鐵礬蘇木精染色制片。當(dāng)然，醋酸洋紅和孚爾根反應(yīng)也可以。細(xì)胞質(zhì)染色應(yīng)淺淡，以辨清細(xì)胞質(zhì)的完整輪廓為準(zhǔn)。常用鐵礬蘇木精過染，再用45％醋酸軟化和分色，結(jié)果染色體著色藍(lán)黑而鮮明，細(xì)胞質(zhì)淺淡而不明顯，增大了色彩的對比，擴(kuò)大了影象的明暗反差。
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&HUQ?^ Pwn"!pk 4、清潔無塵，消除氣泡 制片中的灰塵異物和氣泡，有損影象的質(zhì)量，防礙觀察。氣泡為臨時(shí)制片的常見弊病，小的氣泡有礙觀瞻；大的氣泡連片，推擠染色體，堆積集中，損壞了好的影象。要隨時(shí)滴加所用的臨時(shí)封固液，消除氣泡。
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