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    [分享]激光掃描共焦顯微鏡技術(shù)及其應(yīng)用 [復(fù)制鏈接]

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    只看樓主 倒序閱讀 樓主  發(fā)表于: 2007-07-18
      樣品要求: B&+)s5hh  
    1.經(jīng)熒光探劑標(biāo)記(單標(biāo)、雙標(biāo)、三標(biāo)) elGwS\sw  
    2.固定的或活的組織 *'cyFu$  
    3.固定的或活的貼壁培養(yǎng)細(xì)胞(Confocal專用小培養(yǎng)皿,蓋玻片) Ul<:Yt&nI  
    4.懸浮細(xì)胞,甩片或滴片后,用蓋玻片封 |)65y  
    一. 組成 (fun,(R6"  
        倒置或直立熒光顯微鏡、掃描頭(照明針孔、探測(cè)針孔、熒光濾片系統(tǒng)、鏡掃描系統(tǒng)和光電倍增管)、掃描頭控制電路、計(jì)算機(jī)和圖像輸出設(shè)備 Q?2Gw N  
    二. 原理 ) ^`V{iD  
    Confocal -pHUC't  
        利用放置在光源后的照明針孔和放置在檢測(cè)器前的探測(cè)針孔實(shí)現(xiàn)點(diǎn)照明和點(diǎn)探測(cè),來自光源的光通過照明針孔發(fā)射出的光聚焦在樣品焦平面的某個(gè)點(diǎn)上,該點(diǎn)所發(fā)射的熒光成像在探測(cè)針孔上,該點(diǎn)以外的任何發(fā)射光均被探測(cè)針孔阻擋。照明針孔與探測(cè)針孔對(duì)被照射點(diǎn)或被探測(cè)點(diǎn)來說是共軛的,因此被探測(cè)點(diǎn)即共焦點(diǎn),被探測(cè)點(diǎn)所在的平面即共焦平面。計(jì)算機(jī)以像點(diǎn)的方式將被探測(cè)點(diǎn)顯示在計(jì)算機(jī)屏幕上,為了產(chǎn)生一幅完整的圖像,由光路中的掃描系統(tǒng)在樣品焦平面上掃描,從而產(chǎn)生一幅完整的共焦圖像。只要載物臺(tái)沿著Z軸上下移動(dòng),將樣品新的一個(gè)層面移動(dòng)到共焦平面上,樣品的新層面又成像在顯示器上,隨著Z軸的不斷移動(dòng),就可得到樣品不同層面連續(xù)的光切圖像。 k`((6  
    三. 激光掃描共焦顯微鏡的設(shè)計(jì)特點(diǎn): SE$~Wbj?  
    1.點(diǎn)照明 ?,`g h}>  
    2.具有照明pinhole和探測(cè)pinhole ~l8w]R3A  
    3.照明pinhole和探測(cè)pinhole共軛(共焦), 共焦點(diǎn)即被探測(cè)點(diǎn),被探測(cè)點(diǎn)所在的平面為共焦平面 z"c,TlVN3  
    4.具有掃描系統(tǒng)―― 逐點(diǎn)掃描成像 cTBUj  
    5.具有多個(gè)(四個(gè)) 熒光通道,可同時(shí)探測(cè)多個(gè)被標(biāo)記物 <{T5}"e  
    Leica TCS NT 的技術(shù)指標(biāo): c'INmc I|  
    1. xy分辨率比傳統(tǒng)顯微鏡小1.4x y8ODoXk  
    傳統(tǒng)顯微鏡: Rxy=0.61l/NA N*f ]NCSi  
    Confocal: Rxy=0.4l/NA P=aYwm